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Xterra色譜柱的啟用(安裝、平衡和柱效測試)

更新時間:2024-09-11      點擊次數(shù):1460

Xterra色譜柱的啟用(安裝、平衡和柱效測試)

 

每一根XTerra™色譜柱都有柱性能測試報告Performance Test Chromatogram 和所用填料的分析報告Certificate of Analysis,填料的分析報告儲存在色譜柱包裝盒內(nèi)的技術(shù)信息CD上,是所用填料的批次分析報告,其中包括填料的批號、填料顆粒鍵合前和鍵合后的分析數(shù)據(jù)、測試結(jié)果和所用的測試條件;性能測試報告是針對每根色譜柱的測試報告,包括以下信息:

料批號、色譜柱序列號,USP塔板數(shù)、拖尾因子,容量因子以及所用的測試條件。用戶應該儲存這些信息以便在將來做參考。

a.色譜柱的安裝

  提示:以下的流速適用于4.6mm內(nèi)徑,粒徑為5μm的色譜柱,請根據(jù)色譜柱內(nèi)徑、長度、填料粒徑以及壓力適當?shù)貙α魉龠M行調(diào)節(jié)。請參考第三節(jié)了解如何根據(jù)色譜柱的規(guī)格調(diào)整流速,參考第五節(jié)了解有關(guān)HPLC系統(tǒng)連接的更多信息。

1.沖洗含有任何緩沖鹽的泵系統(tǒng),將色譜柱入口端連接到進樣器的出口端,色譜柱上的箭頭標明了流動相的流向(先不要接檢測器)。

2.0.1mVmin流速條件下用100%甲醇或乙腈沖洗色譜柱,然后在5分鐘內(nèi)將流速升至0.5ml/min。

3.當溶液均勻地從柱子出口流出時,停掉流速,將色譜柱出口端接到檢測器上(這樣操作可以避免氣泡進入檢測系統(tǒng),并且可快速達到基線平衡)。

4.按照步驟2的方法逐漸提高流速。

5.一旦壓力達到穩(wěn)定值并且基線平衡好后,則進入下一步操作。

說明:如果流動相中含有低濃度的流動相改性劑如離子對試劑,要達到完全平衡可能需要100倍甚至200倍柱體積的流動相:此外,對于含有甲酸或甲

 

b.色譜柱平衡

  XTerra™色譜柱是用100%乙腈保存的,在使用其它的流動相系統(tǒng)前一定要確保流動相和色譜柱內(nèi)溶劑的“相容性"。至少用10倍柱體積的流動相平衡色譜柱(見表1中不同規(guī)格色譜柱的柱體積數(shù)值)。

image.png

為了避免流動相中的緩沖鹽在色譜柱或系統(tǒng)中析出,在換上流動相之前,需要用5倍柱體積的水與有機溶劑的混合溶液(將緩沖溶液用水替代,要求有機溶劑的含量比流動相中的含量略低或相等,如在使用60/40的甲醇/緩沖鹽流動相之前先用5倍柱體積的60/40甲醇/水溶液沖洗色譜柱)。

 

c. 測試色譜柱的柱效

1. 在開始使用色譜柱分析樣品前先測量色譜柱的柱效,沃特世建議選用合適的待測物測試柱效,如采用色譜柱性能測試報告中的樣品和條件[加入柱效測試條件]

2.計算塔板數(shù),用這個數(shù)據(jù)作為對照,定期監(jiān)控色譜柱的柱效。

3.隨著色譜柱的使用,需要定期作同樣的測試以便追蹤色譜柱的性能變化,由于不同儀器的管路連接、操作環(huán)境、系統(tǒng)電路、所使用的溶劑和試劑的質(zhì)量、色譜柱條件以及操作者的技術(shù)都有可能不同,因此在不同的HPLC系統(tǒng)上測試的結(jié)果可能會有一些差別。


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