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怎么使Waters ACQUITY BEH色譜柱保持良好的性能?

更新時(shí)間:2022-10-14      點(diǎn)擊次數(shù):1176

怎么使Waters ACQUITY BEH色譜柱保持良好的性能?


為確保Waters ACQUITY BEH色譜柱始終保持理想性能,請(qǐng)遵循以下原則:

 

a. 樣品前處理

1. 樣品中的雜質(zhì)往往會(huì)污染色譜柱。避免污染的方法之一是在分析之前使用填充有適合填料的Waters Oasis™固相萃取小柱/色譜柱或Sep-Pak™小柱凈化樣品。

2. 為獲得理想峰形和靈敏度,優(yōu)先選用運(yùn)行分析時(shí)擬用的流動(dòng)相或比它更弱的流動(dòng)相來制備樣品。除非安裝了正己烷/四氫呋喃兼容性配件包,否則切勿將丙酮用作樣品溶劑/稀釋劑。

3. 如果樣品不溶于流動(dòng)相,請(qǐng)確保樣品、溶劑和流動(dòng)相可以混溶,以避免樣品和/或緩沖鹽析出。

4. 0.2 _m濾膜過濾樣品,去除顆粒物質(zhì)。如果用于溶解樣品的溶劑含有機(jī)溶劑(如乙腈、甲醇等),請(qǐng)確保濾膜材料不溶于該溶劑。請(qǐng)聯(lián)系濾膜生產(chǎn)商了解濾膜的溶劑兼容性?;蛘撸梢钥紤]在8000 rpm下離心樣品溶液20 min,然后將上清液轉(zhuǎn)移至適當(dāng)?shù)臉悠菲恐小?/span>

5. 對(duì)于親水作用色譜(HILIC)分離,樣品必須用高百分比的有機(jī)溶劑制備(例如95%乙腈)。請(qǐng)參閱相關(guān)章節(jié)。

 

b. pH范圍

ACQUITY BEH色譜柱的推薦操作pH范圍如下:采用BEH C18、BEH C8BEH苯基填料為1~12;采用BEH Shield RP18BEHAmide填料為2~11;采用BEH HILIC填料為1~9。表2列出了常用的緩沖鹽和添加劑。此外,柱壽命將根據(jù)操作溫度、使用的緩沖鹽類型和濃度而有所不同。例如,在高溫下使用pH值為8的磷酸鹽緩沖液會(huì)縮短色譜柱壽命。

 

c. 溶劑

為了保持理想的色譜柱性能,請(qǐng)使用高品質(zhì)色譜級(jí)溶劑。所有水相緩沖鹽在使用前都應(yīng)使用0.2 _m濾膜過濾。推薦使用PallGelman Laboratory Acrodisc®過濾器。含有懸浮顆粒物的溶劑

通常會(huì)堵塞色譜柱入口篩板,這會(huì)導(dǎo)致操作壓力增大,性能變差。有關(guān)詳細(xì)信息,請(qǐng)參閱相關(guān)章節(jié)。

 

d. 壓力

ACQUITY BEH色譜柱能夠承受高達(dá)18000psi1241 bar124 MPa)的操作壓力。

注:在壓力、pH/或溫度的極值下運(yùn)行會(huì)縮短色譜柱使用壽命。

 

e. 溫度

為了改善選擇性、降低溶劑粘度和提高傳質(zhì)速率,ACQUITYBEH色譜柱的推薦操作溫度范圍為20 °C~90 °C。在高pH條件下操作時(shí),建議降低操作溫度以延長色譜柱使用壽命。在較高

溫度下(如70 °C以上)運(yùn)行也可能縮短色譜柱使用壽命。在HILIC分析中,BEH Amide色譜柱可以在高pH值和高溫條件下使用,不會(huì)出現(xiàn)問題(請(qǐng)參閱“BEH Amide色譜柱入門"章節(jié)的推薦條件)。

 

2.使用ACQUITY BEH色譜柱時(shí)的推薦緩沖鹽

添加劑/緩沖液

pK,

緩沖液范圍

揮發(fā)性(±1個(gè)pH單位)

能否用于質(zhì)譜

注釋

TFA

0.3

揮發(fā)性

可用

離子對(duì)添加劑,能抑制MS信號(hào),

0.02%~0.1%范圍內(nèi)使用。

乙酸

4.76

揮發(fā)性

可用

與醋酸銨-起使用時(shí)緩沖能力非常強(qiáng)。

0.1%~1.0%范圍內(nèi)使用。

醋酸鹽(NH3 CH3CO2)

3.75

揮發(fā)性

可用

與甲酸銨-起使用時(shí)緩沖能力非常強(qiáng)。

0.1%~ 1.0%范圍內(nèi)使用。

甲酸鹽(NH4HCO2)

4.76

3.76-5.76

揮發(fā)性

可用

1~10 mM范圍內(nèi)使用。

:其鈉鹽或鉀鹽無揮發(fā)性。

磷酸鹽1

3.75

2.75-4.75

揮發(fā)性

可用

1~10 mM范圍內(nèi)使用。

:其鈉鹽或鉀鹽無揮發(fā)性。

磷酸鹽2

2.15

1.15-3.15

非揮發(fā)性

不可用

常用的低pH緩沖液,具有良好的UV透光性。

磷酸鹽3

7.2

6.20-8.20

非揮發(fā)性

不可用

pH值大于7時(shí),需要降低柱溫/濃度并使用保護(hù)柱,以便盡可能延長使用壽命。

4-甲基嗎fei

12.3

11.3-13.3

非揮發(fā)性

不可用

pH值大于7時(shí),需要降低柱溫/濃度并使用保護(hù)柱,以便盡可能延長使用壽命。

氨水(NH4OH)

~8.4

7.4-9.4

揮發(fā)性

可用

通常在10mM或更低濃度下使用。

碳酸氫銨

9.2

10.3(HCO3-)

9.2   (NH4+)

8.2-10.2

8.2-11.3

揮發(fā)性

揮發(fā)性

可用

可用

5~10mM范圍內(nèi)使用(進(jìn)行MS分析時(shí),需保持源溫度> 150°C)。用氨水或醋酸調(diào)節(jié)pH值。pH=10時(shí)具有良好的緩沖容量。

:請(qǐng)使用碳酸氫銨(NH,HCO),而不是碳酸銨(INH4)2CO3)。

醋酸銨

9.2

8.2-10.2

揮發(fā)性

可用

1~10 mM范圍內(nèi)使用。

甲酸銨

9.2

8.2-10.2

揮發(fā)性

可用

1~10 mM范圍內(nèi)使用。

硼酸鹽

9.2

8.2-10.2

非揮發(fā)性

不可用

需要降低柱溫/濃度并使用保護(hù)柱,以便盡可能延長使用壽命。

CAPSO

9.7

8.7-10.7

非揮發(fā)性

不可用

兩性離子緩沖液,兼容乙腈,在1~10 mM范圍內(nèi)使用。氣味小。

甘氨酸

2.4,   9.8

8.8-10.8

非揮發(fā)性

不可用

兩性離子緩沖液,相較于硼酸鹽緩沖液更有助于延長色譜柱壽命。

1-甲基哌啶

10.2

9.3-11.3

揮發(fā)性

可用

1~10 mM范圍內(nèi)使用。

CAPS

10.4

9.5-11.5

非揮發(fā)性

不可用

兩性離子緩沖液,兼容乙腈,在1~10mM范圍內(nèi)使用。氣味小。

三乙胺(用作醋酸鹽)

10.7

9.7-11.7

揮發(fā)性

可用

0.1%~1.0%范圍內(nèi)使用。僅當(dāng)使用乙酸滴定時(shí)具有揮發(fā)性(使用鹽酸或磷酸滴定時(shí)無揮發(fā)性)。在DNA分析(pH 7~9)中用作離子對(duì)試劑。

吡咯烷

11.3

10.3-12.3

揮發(fā)性

可用

溫和型緩沖液,可延長柱壽命。

注:在pH、溫度和/或壓力的極值下運(yùn)行會(huì)縮短色譜柱使用壽命。

 

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